新冠病毒肺炎流式標(biāo)本處理注意事項(xiàng)

前言：國(guó)家衛(wèi)健委批準(zhǔn)，1月25日發(fā)布的《北京協(xié)和醫(yī)院關(guān)于“新型冠狀病毒感染的肺炎”診療建議方案（V2.0)》**條“2019-nCoV病人的診療-診斷標(biāo)準(zhǔn)中提到：對(duì)于急性發(fā)熱對(duì)于急性發(fā)熱（72h內(nèi)，體溫大于37.5度）且肺部影像學(xué)正常者，若外周血**細(xì)胞***小于0.8×109/L，或出現(xiàn)CD4及CD8 T細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯下降者，即使核酸檢測(cè)未呈現(xiàn)陽(yáng)性，均應(yīng)居家隔離密切觀察。病人常規(guī)檢查中提到：1、篩查病例，就診當(dāng)日可酌情查炎癥因子（IL-6,IL-10,TNF-α）、TB亞群11項(xiàng).2、確診病人序貫檢查，第5-7天若有條件可復(fù)查TB**細(xì)胞亞群11項(xiàng)。

可以從診療指南中看到，**功能越來(lái)越受重視，尤其是臨床**的過(guò)程中**功能狀態(tài)的改變。僅僅做**細(xì)胞亞群還不夠，活化以及T細(xì)胞功能評(píng)價(jià)的指標(biāo)也必不可少。

正是因?yàn)?*受到臨床的重視，許多新冠病人的定點(diǎn)醫(yī)院都開(kāi)展了流式的檢測(cè)。而我們的流式工作的老師，除了結(jié)果的準(zhǔn)確及解讀以外，也需要關(guān)注生物**的防護(hù)。

整理了流式樣本處理過(guò)程中一些注意事項(xiàng)，獻(xiàn)給我們的流式工作者們。

01樣本加樣
建議在生物**柜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，如有液體濺出，用浸濕75%酒精的紗布覆蓋后擦拭。個(gè)人按照3級(jí)生物**進(jìn)行防護(hù)。

02溶血及固定
根據(jù)衛(wèi)生部2011年發(fā)布的《流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血**細(xì)胞亞群指南》，盡量使用含固定劑的溶血素（如貝克曼庫(kù)爾特的流式細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)㏄N: A11895，或可延長(zhǎng)溶血時(shí)間至30min，加等量pbs混勻后上機(jī)），可以達(dá)到滅活病毒的作用。
如采用貝克曼庫(kù)爾特自動(dòng)溶血儀器，可配套使用Beckman Coulter Immunoprep（PN: 7546946），程序運(yùn)行結(jié)束后放置30min，可以達(dá)到滅活病毒的作用。
如使用其他不帶固定劑成分的溶血素（如氯化銨，或者貝克曼庫(kù)爾特 Versalyse等, PN: A09777），也可以配制0.1%-2.0%的多聚甲醛或甲醛，或者稀釋好的細(xì)胞保存液（PN：A07800）在溶血時(shí)一起加入，并且放置30min，可以達(dá)到滅活病毒的作用。

03混勻、離心等步驟防護(hù)
滅活前的樣品處理步驟，須嚴(yán)格按照三級(jí)防護(hù)，謹(jǐn)防氣溶膠污染，例如：

使用帶生物**密封蓋或密封杯的離心機(jī)進(jìn)行離心（如Beckman Coulter高速冷凍離心機(jī)配套的 AeroSolve透明密封杯系列，359232），樣品管/流式管*好帶密封蓋離心，不使用自動(dòng)脫帽離心功能；

即使室溫離心，也選用密封更良好的制冷型離心機(jī)（如Beckman Coulter Avanti J-15R，PN: B99515），并置于負(fù)壓抽風(fēng)區(qū)域；

離心后靜置10-30分鐘再開(kāi)蓋，仔細(xì)觀察樣品無(wú)泄漏后，再把透明密封杯移至生物**柜再開(kāi)蓋取樣。

04儀器的清洗及維護(hù)
如有樣本的灑溢，請(qǐng)用浸濕75%酒精的紗布覆蓋30min后擦拭，包括樣本進(jìn)樣針。
流式細(xì)胞儀的廢液桶中需要裝有占其體積 1/10的0.71mol/L次氯酸鈉 (未稀 釋的家用漂白劑)。 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備應(yīng)該用具有滅活傳染源作用的溶液或新配制的 10%家用漂白劑** ,尤其在設(shè)備維修和保養(yǎng)前給予嚴(yán)格**。

流式工作者們請(qǐng)?jiān)诖_認(rèn)防護(hù)**的情況下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，貝克曼庫(kù)爾特的技術(shù)應(yīng)用專家們時(shí)刻準(zhǔn)備著做好支持工作，共克時(shí)艱！

涉及的產(chǎn)品信息及注冊(cè)證號(hào)：
PN: A11895 流式細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)?，備案?hào)：國(guó)械備20170672號(hào)
PN: 7546946血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)瑐浒柑?hào)：國(guó)械備20170373號(hào)
PN: A07800 細(xì)胞保存液，備案號(hào)：國(guó)械備20140286
PN: B99515 高速冷凍離心機(jī)；備案號(hào)：國(guó)械備20171151號(hào)
PN: A09777. 血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)﹪?guó)械備20140189號(hào)

參考資料：
1. 《北京協(xié)和醫(yī)院關(guān)于“新型冠狀病毒感染的肺炎”診療建議方案（V2.0)》
2. 2019新型冠狀病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的生物**指南（試行**版）--中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)
http://www.cslm.，org.cn/cn/news.asp?id=73.html&from=gr，oupmessage&isappinstalled=0
3. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血**細(xì)胞亞群指南--2011版衛(wèi)生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（下載文件）

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